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Quali sono i diversi tipi di test sierologici?

Testo aggiornato al 2020-04-30


Sono disponibili diversi tipi di test sierologici per rilevare la presenza di anticorpi specifici contro il coronavirus SARS-CoV-2 nel sangue e la loro efficacia contro una possibile reinfezione.

Esistono tre tipi di test sierologici con diversi limiti, sensibilità e costi:

Test diagnostico rapido (RDT): risultato in 10-30 min.

Di solito si tratta di un dispositivo a flusso laterale, piccolo e portatile, che fornisce un esito qualitativo (positivo o negativo). Questi test possono utilizzare campioni di sangue da una puntura al dito, campioni di saliva o tamponi nasali. I TDR sono spesso simili ai test di gravidanza, in quanto delle linee colorate indicano il risultato positivo o negativo. Per il virus SARS-CoV-2, questi test solitamente testano la presenza degli anticorpi del paziente (IgG e IgM), o dell'antigene virale. Questi test non sono in grado di determinare la quantità di anticorpi presenti nel siero del paziente, né se questi sono in grado di prevenire future infezioni.


Test immuno-enzimatico (ELISA): risultato in 1 - 5 ore

Questo test può essere qualitativo o quantitativo e viene di solito eseguito in laboratorio. Si effettua in genere a partire da campioni di sangue intero, o frazioni di sangue dei pazienti. Il test si basa sull'uso di una piastra rivestita con la proteina virale di interesse, ad esempio la proteina "Spike" dell'involucro virale. I campioni ottenuti dai pazienti vengono incubati con la proteina, e se sono presenti anticorpi contro la proteina virale, vi si attaccano. Il complesso proteina-anticorpo può quindi essere visualizzato grazie ad un altro "anticorpo" che vi si lega e produce un segnale colorato o fluorescente. Per il coronavirus COVID-19, questi test vengono spesso usati per rilevare la presenza di anticorpi prodotti dal paziente (IgG e IgM). Tuttavia, questi test non sono in grado di dirci se gli anticorpi sono neutralizzanti, cioè in grado di proteggerci da future infezioni da parte dello stesso virus.


Test di neutralizzazione:r isultato in 3-5 giorni

Questo test rileva la presenza di anticorpi che sono in grado di impedire l'infezione da parte del virus nelle cellule in laboratorio. I test di neutralizzazione possono indicare ai ricercatori se un paziente, anche asintomatico o guarito, possiede anticorpi attivi ed efficaci contro il virus. Per questi test sono necessari campioni di sangue. I test di neutralizzazione utilizzano le colture cellulari, uno strumento di laboratorio che permette al virus SARS-CoV-2 di moltiplicarsi nelle cellule fuori dall'organismo. Quando il virus e le cellule vengono sottoposti a concentrazioni decrescenti di anticorpi del paziente, i ricercatori possono trovare la dose di anticorpi del sangue del paziente che può bloccare la moltiplicazione del virus. Questi test possono determinare se quegli anticorpi sono in grado di proteggerci da infezioni future, ma non possono rilevare la presenza di anticorpi contro le proteine virali che non sono coinvolte nel processo di infezione.


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Fonti

Synthèse de l'université de John Hopkins sur les tests sérologiques développés principalement par les Etats-Unis, Chine, la Corée du Sud, Singapour, l’Allemagne et l’Angleterre.


Cinetica della risposta anticorpale: utilizzando un test ELISA basato sul nucleocapside virale ricombinante, uno studio ha esaminato la risposta umorale dell'ospite a SARS-CoV-2, compresa la risposta IgA, IgM e IgG. Un totale di 208 campioni di plasma sono stati raccolti da 82 casi positivi confermati e 58 probabili. Il valore diagnostico di IgM è stato valutato in questa coorte. La durata mediana relativa alla presenza degli anticorpi IgM e IgA è stata di 5 giorni, mentre le IgG sono state rilevate oltre 14 giorni dopo l'insorgenza dei sintomi, con una percentuale positiva rispettivamente dell'85,4%, del 92,7% e del 77,9%.

Wu, F., Wang, A., Liu, M., Wang, Q., Chen, J., Xia, S., ... & Jiang, S. (2020). Neutralizing antibody responses to SARS-CoV-2 in a COVID-19 recovered patient cohort and their implications.

Uno studio ha misurato la cinetica delle risposte IgM e IgG in 34 pazienti:

Xiao, Gao and Zhang. J Inf 2020. Profile of specific antibodies to SARS-CoV-2: The first report.

Sono stati inoltre eseguiti test immunologici in 16 pazienti a Hong Kong utilizzando campioni di siero raccolti 14 giorni o più dopo l'insorgenza dei sintomi. Sono stati riportati i seguenti tassi di sieropositività: 94% per le IgG anti-N IgG (n=15), 88% per le IgM anti-N IgM (n=14), 100% per le IgG anti-RBD IgG (n=16) e 94% per le IgM anti-RBD IgM (n=15). I livelli di IgG anti-SARS-CoV-2-N o anti-SARS-CoV-2-RBD sono correlati al titolo di neutralizzazione del virus.

To KK, Tsang OT, Leung WS, Tam AR, Wu TC, Lung DC, Yip CC, Cai JP, Chan JM, Chik TS, Lau DP, Choi CY, Chen LL, Chan WM, Chan KH, Ip JD, Ng AC, Poon RW, Luo CT, Cheng VC, Chan JF, Hung IF, Chen Z, Chen H, Yuen KY. Temporal profiles of viral load in posterior oropharyngeal saliva samples and serum antibody responses during infection by SARS-CoV-2: an observational cohort study. Lancet Infect Dis. 2020 Mar 23. pii: S1473-3099(20)30196-1.

Uno studio ha caratterizzato la risposta anticorpale in una coorte di 175 pazienti COVID-19 con sintomi lievi. I pazienti anziani e di mezza età avevano titoli di NAb plasmatici e anticorpi fissanti significativamente più elevati<0,0001 et="" P="0,0003" respectivement="" e="" que="" ceux="" des="" jeunes="" patients.<="" p=""> Wu, F., Wang, A., Liu, M., Wang, Q., Chen, J., Xia, S., ... & Jiang, S. Neutralizing antibody responses to SARS-CoV-2 in a COVID-19 recovered patient cohort and their implications.

Catalan-Dibene ha commentato uno studio che mostra l'esistenza di cellule "memoria specifiche" per il virus, le quali riconoscono la proteina S del SARS-CoV-2 nei pazienti infetti.

Catalan-Dibene J. Human antibodies can neutralize SARS-CoV-2. Nat Rev Immunol. 2020 Apr 14.

Descrizione dei test sierologici Pasteur di alta qualità: la sieroconversione e la neutralizzazione anticorpale del coronavirus si sono verificati 5-14 giorni dopo l'insorgenza dei sintomi, confermando gli studi precedenti.

Grzelak, L., Temmam, S., Planchais, C., Demeret, C., Huon, C., Guivel, F., . . . van der Werf, S. (2020). SARS-CoV-2 serological analysis of COVID-19 hospitalized patients, pauci-symptomatic individuals and blood donors. medRxiv, 2020.2004.2021.20068858. doi:10.1101/2020.04.21.20068858.

Per saperne di più

Per cosa stanno le abbreviazioni COVID, SARS, CoV, RNA, ecc.?